Информационный сайт для врачей и студентов-медиков

Библиотека - Иммунологические методы (Под редакцией Г. Фримеля)

4. ИММУНОХИМИЯ

4.1. ПОЛУЧЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ

4.1.1. ВЫДЕЛЕНИЕ ИММУНОГЛОБУЛИНА G (IgG)

4.1.1.1. ПРИНЦИП МЕТОДА

В отличие от иммуноглобулинов других классов IgG сравнительно просто выделить в чистом виде. Выделение проводят путем осаждения сульфатом аммония и хроматографии на анионооб-менниках, например ДЭАЭ-целлюлозе или ДЭАЭ-сефадексе. Исходным материалом служит сыворотка. IgG представляет собой гетерогенную смесь иммуноглобулинов с похожими характеристиками, эти Ig можно разделить на анионообменниках, изменяя ионную силу элюента. Часто перед проведением хроматографию проводят осаждение сульфатом аммония или риванолом (2-эток-си-6, 9-диаминоакридинлактат).

4.1.1.2. ПОЛУЧЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ

С ПОВЫШЕННЫМ СОДЕРЖАНИЕМ IgG

Осаждение сульфатом аммония. К 100 мл сыворотки добавляют 50 мл насыщенного раствора сульфата аммония. Осадок удаляют центрифугированием, растворяют в 50 мл дистиллированной воды и снова осаждают 25 мл насыщенного раствора сульфата аммония. Осаждение повторяют 4—5 раз. Затем препарат диализуют против соответствующего буфера. Иногда осаждение проводят при 40% насыщении соли, что увеличивает выход, но снижает чистоту препарата. Иногда насыщение сульфата аммония выражают в молях; насыщенный раствор при 0°С соответствует 3,9 М (514,72 г в 1 л), при 20°С —4,06 М (536,34 г в 1 л).

Осаждение сульфатом натрия. К 100 мл сыворотки при комнатной температуре добавляют 18 г сульфата натрия (при 4°С растворимость сульфата натрия уменьшается). Осадок растворяют в 40 мл фосфатного буфера с рН 8,0 и ионной силой 0,1. Переосаждают белок, прибавив 4,8 г сульфата натрия. Осадок после центрифугирования растворяют в 20 мл фосфатного буфера (см. выше) и переосаждают 2,4 г сульфата натрия. Выпавший осадок отделяют, растворяют в небольшом количестве буфера, диализуют.

Методы иммуноанализа

Scroll To Top
[ Reset Settings ]
Rambler's Top100
Картаsns krf e0 nd5 ah81 rod solnce rod solnc cent1 cen40
rss
Карта