Информационный сайт для врачей и студентов-медиков

Библиотека - Иммунологические методы (Под редакцией Г. Фримеля)

Снова фильтруют и отмывают 0,01 М фосфатным буфером. Доводят рН с помощью 1 М К2НРО4 до 7,5 для предотвращения образования нерастворимого продукта. Раствор IgG диализуют против дистиллированной воды, после чего его лиофилизируют. После лиофилизации IgG приобретает склонность к агрегации. Использованный сефадекс регенерируют 1 М NaCl, 0,5 М NaOH и этанолом. Этанол удаляет адсорбированные липиды. Избыток щелочи отмывают дистиллированной водой, после чего ионооб-менник переводят в фосфатную форму как было описано выше.

4.1.1.3.3. Обсуждение

Метод приготовления IgG из сыворотки человека состоит по существу из одного этапа. Хроматография на колонке является более эффективным методом, чем метод спонтанной седиментации (англ. Batch method). Однако ввиду того, что гель изменяет объем в зависимости от ионной силы, регенерация геля непосредственно на колонке невозможна, гель приходится выбивать из колонки. При получении больших количеств IgG желательно до хроматографии провести еще одну стадию очистки. Возможно также использовать для хроматографии QAE-сефадекс, объем гранул которого не зависит от рН. В качестве элюента используют смесь этилендиамида и уксусной кислоты с рН 7,0, ионной силой 0,1; регенерируют сорбент натрий-ацетатным буфером с рН 4,0 с ионной силой 0,1. Липопротеиды удаляют 5% раствором твина-80 в ацетатном буфере. Этилендиамин-ацетатный буфер улетучивается при лиофилизации, что является преимуществом. Перед лиофилизацией концентрацию IgG доводят до 30 г/л, так как в случае меньших концентраций образуются нерастворимые продукты. Протеин А из клеточной стенки Staphylococcus aureus осаждает IgG 1,2 и 4, но не IgG3. Формалинизи-рованную культуру золотистого стафилококка можно использовать для специфической очистки IgG3. IgG 1,2 и 4 можно десор-бировать с иммобилизованного протеина А при помощи глицин-солянокислого буфера с рН 3,0, а также электрофоретически [9]. Градиентом рН удается десорбировать IgG 1 и 2 с протеин-А-сефарозы с 90% и 95% чистотой соответственно [2]. Подклассы IgG можно также выделить при помощи антисывороток со специфичностью к отдельным подклассам, конъюгированных с бромциансефарозой [3].

4.1.1.4. ВЫДЕЛЕНИЕ IgG ИЗ СЫВОРОТКИ КРОЛИКА

Очистку IgG кролика можно осуществлять в следующих условиях:

а) хроматографию проводят на ДЭАЭ-целлюлозе в 0,01 М фосфатном буфере с рН 8,0 или в 0,0175 М фосфатном буфере с рН 6,3. Перед хроматографией сыворотку диализуют против соответствующего буфера. Элюируется чистый IgG, остальные белки задерживаются на колонке;

Методы иммуноанализа

Scroll To Top
[ Reset Settings ]
Rambler's Top100
Картаsns krf e0 nd5 ah81 rod solnce rod solnc cent1 cen40
rss
Карта