Библиотека - Иммунологические методы (Под редакцией Г. Фримеля)

б) после хроматографии на ДЭАЭ-сефадексе А-50 в 0,0175 М фосфатном буфере с рН 6,3, на ДЭАЭ-целлюлозе в 0,0175 М фосфатном буфере с рН 6,9 или в 0,025 М фосфатном буфере с рН 6,9 IgG осаждают сульфатом натрия;

в) трехкратно осаждают IgG сульфатом аммония (конечная концентрация 1,35 М) при рН 7,0, проводят диализ против дистиллированной НгО. Хроматографируют белок на ДЭАЭ-целлюлозе в 0,02 М фосфатном буфере с рН 7,2;

г) осаждают IgG сульфатом аммония в конечной концентрации 37, 40 или 43% насыщения с последующей хроматографией на ДЭАЭ-целлюлозе в 0,0175 М фосфатном буфере с рН 6,3;

д) предварительно осаждают IgG сульфатом аммония или риванолом, затем хроматографируют на ДЭАЭ-целлюлозе. Элю-ирование проводят фосфатными буферами:

1) 0,0175 М с рН 6,9; 2) 0,035 М с рН 7,5; 3) 0,05 М с рН 7,5. Фракции 1 и 2 представляют собой чистый Ig, фракцию 3 очищают гель-фильтрацией на сефадексе G-200 (0,2 М трис, 0,5 М глицин, рН 8,2).

При хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе или ДЭАЭ-сефадексе А-50 IgG кролика удается разделить на 2 фракции, «медленную» и «быструю» (по электрофоретической подвижности). Сыворотку диализуют против стартового буфера (0,035 М трис, 0,005 М фосфорная кислота рН 8,4), хроматографируют на ДЭАЭ-целлюлозе в этом же буфере. При этом элюируется «медленный» IgG. Если вести дальше элюцию смесью 0,5 М трис —■ 0,59 М фосфорная кислота с рН 4,0, то вначале появляется пик, отражающий содержание чистого «быстрого» IgG, затем элюируется «быстрый» IgG в смеси с другими сывороточными белками. При хроматографии сыворотки на ДЭАЭ-сефадексе А-50 также можно выделить две фракции IgG, идентичные иммуно-электрофоретически, но различающиеся по подвижности при электрофорезе. Первую фракцию выводит стартовый буфер, вторая элюируется градиентом 0,2—0,3 М фосфатного буфера с рН 8,0. Соотношение величин обеих фракций зависит от моляр-ности стартового буфера.

4.1.1.5. ВЫДЕЛЕНИЕ IgG ИЗ КУРИНОЙ СЫВОРОТКИ

IgG из куриной сыворотки получают трехкратной преципитацией сульфатом натрия (180, 140 и 125 г/л) с последующей хроматографией на ДЭАЭ-целлюлозе в 0,05 М фосфатном буфере с рН 8,0.

4.1.1.6. ВЫДЕЛЕНИЕ IgG ИЗ СЫВОРОТКИ ЛОШАДИ

Лошадиный IgG готовят методом ионообменной хроматографии из нормальной сыворотки на ДЭАЭ-целлюлозе в 0,01 М фосфатном буфере с рН 8,0. Дальнейшую очистку можно проводить

Методы иммуноанализа

Scroll To Top
[ Reset Settings ]
Rambler's Top100
Картаsns krf e0 nd5 ah81 rod solnce rod solnc cent1 cen40
rss
Карта