Информационный сайт для врачей и студентов-медиков

Библиотека - Иммунологические методы (Под редакцией Г. Фримеля)

осаждением сульфатом аммония при 37% насыщения с последующей доочисткой на ТЭАЭ-целлюлозе в 0,00525 М фосфатном буфере. IgG можно выделить из нормальной сыворотки лошади на ДЭАЭ-сефадексе в 0,0175 М фосфатном буфере с рН 6,3. Если в идентичных условиях выделять IgG из иммунной сыворотки, получается препарат, загрязненный IgG (Т).

В ходе рехроматографии на ДЭАЭ-сефадексе А-50 в 0,015 М фосфатным буфере с рН 8,4 IgG не адсорбируется, a IgG (Т) задерживается на колонке, откуда он может быть элюирован градиентом фосфатный буфер 0,015 М с рН 8,4 — фосфатный буфер 0,175 М с рН 6,3. Выделенный таким образом IgG (Т) содержит примесь IgG, которую удаляют методом зонального электрофореза. IgG (Т) ранее называли IgA (Т), Т-глобулином или А-глобулином. Тяжелая цепь IgG (Т) имеет общие детерминанты с IgG лошади других подклассов (IgG а, Ь, с) лошади и при ионообменной хроматографии элюируется вслед за IgGa,b, с. IgG a, b элюируется с 0,005—0,01 М фосфатным буфером с рН 8,0, IgG с — 0,02 М фосфатным буфером с рН 8,0.

4.1.1.7. ВЫДЕЛЕНИЕ IgG ИЗ СЫВОРОТКИ МОРСКОЙ СВИНКИ

Фракция 7S иммуноглобулинов морской свинки разделяется на 7S yl («быстрая») и 7S у2 («медленная»). Их антигенные детерминанты несколько отличаются друг от друга, так же как и их биологические свойства. Так, например, 7S у 1 в отличие от 7S72 вызывают реакцию пассивной кожной анафилаксии у морских свинок. Обе фракции осаждают из сыворотки при 50% насыщении сульфатом аммония. Их разделяют на ДЭАЭ-целлю-лозе, проводя ступенчатое элюирование фосфатными буферами: 0,005 М с рН 8,0, 0,01 М с рН 6,3, 0,04 М с рН 6,0, 0,1 М с рН 5,8, 0,3 М с рН 5,4. При этом фракция 7 2 элюируется 0,005 М буфером, фракция у 1—0,1 М. Обе эти фракции могут быть разделены на подфракции у 2а и -у2Ь, соответственно у 1а и у lb.

4.1.1.8. ВЫДЕЛЕНИЕ IgG ИЗ СЫВОРОТКИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Из сыворотки крупного рогатого скота при помощи ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-сефадексе А-50 был выделен IgG 2 (известно два подкласса IgG: IgG 1 и 2). Элюцию проводят градиентом 0,01 М трис-HCl с рН 8,6—0,7 М трис-HCl с рН 8,6. Первый пик представляет собой чистый IgG 2. При помощи буфера, содержащего 0,001 М ЭДТА, IgG 1 выделяют из молозива. После обезжиривания и удаления казеина проводят хроматографию на ДЭАЭ-сефадексе А-50; собирают последнюю порцию элюата, не содержащую IgG 2, концентрируют ее и очищают на сефедексе G-200. Первая часть пика 7S содержит чистый IgG 1.

Методы иммуноанализа

Scroll To Top
[ Reset Settings ]
Rambler's Top100
Картаsns krf e0 nd5 ah81 rod solnce rod solnc cent1 cen40
rss
Карта