Библиотека - Иммунологические методы (Под редакцией Г. Фримеля)

4.1.1.9. ВЫДЕЛЕНИЕ IgG ИЗ СЫВОРОТКИ КРЫС И МЫШЕИ

Различают 4 подкласса IgG крыс: IgG 1, IgG 2а, 2b, IgG 2с, которые можно выделить из сыворотки или асцитической жидкости крысы с соответствующей миеломой [13]. У мыши также описаны 4 подкласса IgG: IgG 1, IgG 2а, IgG 2b и IgG3. Их выделяют из сыворотки мышей с миеломой. Для этого можно использовать зональный электрофорез с последующей электрофокусировкой. Из нормальной мышиной сыворотки IgG получают преципитацией сульфатом аммония (20—30% насыщения) с последующей ионообменной хроматографией на ДЭАЭ-целлюлозе в 0,01 М фосфатном буфере с рН 8,4. IgG можно также получать фракционированием этанолом по Кону, П-фракцию осаждают сульфатом аммония (50% насыщения), затем проводят хроматографию на ДЭАЭ-целлюлозе в 0,01 М фосфатном буфере с рН 7,5 с 0,015 М NaCl. Довольно часто используют очистку на сефадексе G-200. Хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе не так эффективна для очистки мышиного IgG как для очистки IgG других животных. Мышиный IgG довольно прочие связывается с ДЭАЭ-целлюлозой и элюируется вместе с другими сывороточными белками (0,04 М фосфатный буфер с рН 8,0). Первый пик при низкой ионной силе, который при фракционировании сыворотки человека содержит чистый IgG, здесь сильно загрязнен трансферрином. Лучшие результаты дает зональный электрофорез. IgG 1 и IgG 2 могут быть разделены фракционированием этанолом [8]. Элегантным методом разделения IgG на подклассы может стать иммуноадсорбция фракции 7S из асцитической жидкости, полученной после аллоиммунизации.

В клеточной мембране Staphylococcus aureus содержится протеин А, который связывает IgG 2а, IgG2b и IgG3 мыши, но не IgG 1, IgA или IgM. После адсорбции на протеине А, IgG 1 можно отделить от IgA и IgM хроматографией на ДЭАЭ-целлюлозе [6].

4.1.1.10. ВЫДЕЛЕНИЕ IgG ИЗ СЫВОРОТКИ СВИНЬИ

Подклассы IgG 1 и IgG 2 выделяют в чистом виде из молозива [12]. Удаляют жиры, казеин и липопротеиды (см. разделы 4.1.2), затем проводят хроматографию на ДЭАЭ-целлюлозе, затем гель-фильтрацию на сефарозе 6В. Элюцию с ДЭАЭ-целлюлозы проводят градиентом трис- HCl-буфера с рН 7,4, 0,002 М—0,3 М. IgG 2 элюируется исходным буфером; сначала выходит IgG 1, загрязненный IgG 2, затем элюируются IgG 1, S-IgA и IgM. Эти последние можно получить в чистом виде гель-фильтрацией на сефарозе 6В [12].

Методы иммуноанализа

Scroll To Top
[ Reset Settings ]
Rambler's Top100
Картаsns krf e0 nd5 ah81 rod solnce rod solnc cent1 cen40
rss
Карта