Страница №396

4.1.1.11. ВЫДЕЛЕНИЕ IgG ИЗ СЫВОРОТКИ ОВЦЫ

Вначале проводят осаждение сульфатом аммония, затем хроматографию на ДЭАЭ-целлюлозе. В 0,025 М трис-НС1-буфере с рН 7,8 IgG 2 не адсорбируется. При элюции линейным градиентом 0,025 М трис-HCl рН 7,8—0,15 М трис-НС1-буфер с рН 7,8 остатки IgG 2 элюируются вместе с IgG 1, затем выходит IgG 1

4.1.2. ВЫДЕЛЕНИЕ ИММУНОГЛОБУЛИНА A [IgA]

4.1.2.1. ПРИНЦИП МЕТОДА

Выделение IgA представляет известные трудности, поскольку методы, основанные на использовании молекулярного сита или на использовании различного заряда белков, не позволяют в достаточной мере отделить IgA от IgG. Для выделения IgA приходится комбинировать несколько методов, например гель-фильтрацию, осаждение балластных белков сульфатом цинка и зональный электрофорез. Довольно часто применяют ионообменную хроматографию. Небольшие количества IgA можно получать из сыворотки методом иммуноадсорбции. В молозиве человека секреторный IgA является основным иммуноглобулином, но это не характерно для других биологических видов.

4.1.2.2. ВЫДЕЛЕНИЕ IgA ИЗ СЫВОРОТКИ ЧЕЛОВЕКА

4.1.2.2.1. Материалы и оборудование

Для работы необходимы: сыворотка человека, сефадекс С-200, колонки для гель-фильтрации (длина 100 см), певикон, прибор для зонального электрофореза, сульфат декстрана и хлорид кальция для удаления липопротеидов малой плотности.

4.1.2.2.2. Методика

Исходным материалом служит плазма, из которой были удалены фибриноген и р-липопротеиды. Этот материал фильтруют через сефадекс G-200 (рис. 123). IgA элюируется несколько рань-

Рис 123. Хроматография IgA на сефадексе G-200.

После хроматографии фракция 2 была рехроматографирована иа сефадексе G-200. Первая фракция этого разделения подвергалась рехроматографии на сефадексе G-20O и г. д.