Информационный сайт для врачей и студентов-медиков

ТОЧЕЧНЫЙ ТВЕРДОФАЗНЫЙ ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ

Твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA) является наиболее популярным методом при диагностике различных вирусных, бактериальных, грибковых и паразитарных болезней человека и животных. В ELISA используются конъюгаты антител с ферментом, обычно с пероксидазой или щелочной фосфатазой, реагирующими с соответствующими хромогенными субстратами с образованием окрашенного соединения, количество которого можно определить спектрофотометрически. Этот метод пригоден для определения антител или антигенов с двумя эпитопами; он менее трудоемок и менее продолжителен по сравнению с другими ранее применявшимися методами, такими, как реакция связывания комплемента, непрямая гемагглютинация и иммунофлуоресценция. Кроме того, ELISA очень удобен для выполнения большого числа однотипных анализов и поэтому принят во многих научно-исследовательских и клинических лабораториях. Однако ELISA имеет ряд недостатков.

Высокую точность измерений обеспечивают только специальные анализаторы, поэтому ELISA применяется в основном в лабораториях. Кроме того, свойства микротитровальных планшетов, используемых для анализа, изменяются от партии к партии, от планшета к планшету и даже от лунки к лунке (так называемый краевой эффект) [1,2]).

В последнее время наблюдается тенденция к снижению стоимости медицинского обслуживания. В связи с этим среди физиологов и врачей наибольшую популярность приобретают простые методы анализа, не требующие дорогого оборудования. Метод ELISA также претерпел изменения, стал более надежным, более простым в исполнении и приемлемым по цене. Некоторые характеристики обычного и модифицированного ELISA приведены в табл. 9.1. В модифицированном варианте для адсорбции различных имеющихся в продаже антигенов вместо внутренних поверхностей лунок микротитровальных планшетов, на которых не очень эффективно связываются белки, используют нитроцеллюлозные фильтры [3 ]. Такую модификацию называют dot-ELISA (точечный твердофазный иммуноферментый анализ). В dot-ELISA минимальные объемы растворов антигена или антител наносят на нитроцеллюлозе у ю или подобную подложку в виде серии точек, что позволяет выполнить гораздо большее число анализов с тем же количеством реагентов. Преципитируюшие хромогенные субстраты, обычно применяемые в иммуноблоттинге [4 ], на белом нитроцеллюлоз-ном фильтре образуют легко различимые цветные пятна, в результате чего отпадает нужда в дорогих фотометрах. Белый цвет подложки вокруг пятен помогает контролировать реакции неспецифического связывания. Фильтры с результатами анализа могут храниться в темноте в течение многих лет без потери окраски. Кроме того, простота и экономичность в отношении расхода антигенов и реагентов позволяют осуществлять анализы типа dot-ELISA за пределами лаборатории, например в домашних или полевых условиях [5]. В этой главе будет рассмотрено применение методик типа dot-ELISA для диагностики различных заболеваний и специфических состояний человека и животных.

 

1 Dot-ELISA
2 ВИРУСЫ
3 БАКТЕРИИ И ГРИБЫ
4 ПАРАЗИТЫ
5  ПЕРЕНОСЧИКИ
6 НОВЫЕ МЕТОДЫ БЫСТРОЙ ДИАГНОСТИКИ
7 ОБСУЖДЕНИЕ

Методы иммуноанализа

Scroll To Top
[ Reset Settings ]
Rambler's Top100
Картаsns krf e0 nd5 ah81 rod solnce rod solnc cent1 cen40
rss
Карта