Информационный сайт для врачей и студентов-медиков

ПОТЕНЦИОМЕТРИЧЕСКИЙ И АМПЕРОМЕРИЧЕСКИЙ ИММУНОАНАЛИЗ

 

Меченные ферментом антитела стали получать с середины шестидесятых годов. Сначала их использовали для визуального обнаружения антигенов в гистологии и линий преципитации в имму-ноэлектрофорезе [1 ]. Количественное определение иммунореагентов с помощью ферментной метки стало возможным после разработки способов иммобилизации антигенов на твердой подложке [2]. Этим работам предшествовало внедрение в иммуноанализ в

качестве меток радиоактивных изотопов [3, 4], и в то время ферменты казались менее перспективными метками. Радиоиммуноана-лиз (РИА) широко применялся в клинических анализах благодаря хорошей чувствительности и достаточной селективности. В настоящее время все чаще стали обсуждать недостатки РИА, связанные, например, с коротким периодом полураспада иода-125 и проблемами захоронения радиоактивных отходов. Однако простота измерения радиоактивной метки при удовлетворительных чувствительности и точности первоначально обеспечивала методу РИА некоторые преимущества перед методом иммуноферментного анализа (ИФА). Примерно в то же время впервые было описано применение электродов для определения биологических молекул [5]. Первые электроды создавались исключительно на основе ферментов в силу их высокой специфичности к субстратам. Были разработаны ферментные электроды для определения многих компонентов биологических жидкостей, например глюкозы и мочевины. К сожалению, ферменты не обязательно абсолютно специфичны по отношению только к одному субстрату, и поэтому всегда есть вероятность мешающего влияния со стороны других биологических компонентов проб. Несмотря на недостаточную специфичность, ферментные электроды, как и другие электрохимические детекторы, имеют и ряд положительных качеств, в первую очередь относительно низкую стоимость и простоту в эксплуатации. Кроме того, для них характерен низкий предел обнаружения, в ряде случаев приближающийся к пределу обнаружения с помощью РИА.

Электрохимические методы иммуноанализа создавались с целью объединения чувствительности электрохимического детектора и специфичности, присущей реакции взаимодействия антиген-антитело. Существуют два типа электрохимических сенсоров:

1) амперометрические, в которых потенциал электрода инициирует реакцию и измеряется сила тока;

2) потенциометрические, в которых на границе раздела сенсор-раствор устанавливается локальное равновесие и измеряется мембранный или электродный потенциал.

В потенциометрическом иммуноанализе доминируют три направления: 

1) прямое определение степени связывания белков (прямое определение);

2) использование ионо- и газоселективных электродов для определения продуктов иммунохимической реакции с ферментной меткой;

3) включение ионофоров в мембраны ионоселективных электродов.

В большинстве ранних публикаций по пртенциометрическим ферментным детекторам описаны связанные с мембраной антигены и их применение для определения специфических антител [6, 7]. Присоединением ионофора к антигену можно достичь усиления выходного сигнала [8 ]. В более поздних публикациях описаны

сенсоры и для определения антигенов, на мембране которых в свою очередь иммобилизованы антитела [9].

Амперометрические иммуноанализы подразделяют на два основных типа: 1) анализы с использованием ферментных меток, которые катализируют образование электрохимически активного продукта; 2) анализы, в которых сама метка электроактивна или придает электроактивность другим веществам, например путем присоединения нитрогрупп.

Иногда выделяют также вольтамперометрический иммуноанализ с металлоценовыми метками [10]. Амперометрию можно применять как в гомогенном, так и в гетерогенном иммуноанализе. В гомогенных системах нет необходимости в операции отделения свободного антигена от связанного; основой гомогенного иммуноанализа является изменение электрохимической активности или какого-либо другого свойства метки при связывании меченого антигена с антителами, приводящее к изменению интенсивности сигнала. Соответствующие методики очень просты, однако им свойственны и некоторые недостатки. Так, на реакцию связывания может влиять матрикс, что приводит к повышению фонового сигнала. Гетерогенный иммуноанализ, включающий операцию разделения, обладает большей чувствительностью; в этом случае предел обнаружения может приближаться к пределу обнаружения РИА. Операция разделения уменьшает ошибки, обусловленные влиянием компонентов пробы на электрохимическую реакцию, и предохраняет электрод от загрязнения. Опубликован обзор, посвященный стратегии электрохимического иммуноанализа [11 ].

1 ПОТЕНЦИОМЕТРИЧЕСКИЙ ИММУНОАНАЛИЗ
2 АМПЕРОМЕТРИЧЕСКИЙ ИММУНОАНАЛИЗ
3 ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Методы иммуноанализа

Scroll To Top
[ Reset Settings ]
Rambler's Top100
Картаsns krf e0 nd5 ah81 rod solnce rod solnc cent1 cen40
rss
Карта