Информационный сайт для врачей и студентов-медиков

АВИДИН-БИОТИНОВАЯ РЕАКЦИЯ В ИММУНОАНАЛИЗЕ

В последние годы в качестве альтернативы радионуклидам в иммуноанализе нашли широкое применение неизотопные метки, в том числе ферменты [1], хемилюминесцентные соединения [2-7], флуорофоры [8] и коллоидные частицы [9]. Применение неизотопных маркеров затрудняется необходимостью синтезировать, очищать и охарактеризовывать белковые конъюгаты в случае каждого определяемого вещества. Ранее система авидин - биотин нашла широкое применение при локализации, обнаружении и очистке белков [10, 11 ]. Оказалось, что эта система не менее полезна и в иммуноанализе.
  В нашей недавней работе детально рассмотрены два подхода, с помощью которых авидин-биотиновая реакция может быть использована в двухцентровом иммуноанализе. В обоих подходах применяли препараты иммобилизованных и биотинилированных антител. Эти препараты отбирали по принципу распознавания различных эпитопов антигена. В первом подходе сначала иммобилизованные антитела вводили в реакцию с исследуемым образцом и биотинилиро ванными антителами. Затем добавляли конъюгат авидииа или стрептавидииа с ферментом (например, щелочной фосфата зой или пероксидазой хрена) или с хемилюмииесцентным маркером. Во втором подходе вместо белкового конъюгата добавляли свободный авидин или стрептавидин и затем добавляли биотини-лированный фермент. В обоих случаях определение осуществляли спектрофотометрически или по интенсивности люминесценции после добавления соответствующих субстратов. В качестве биотинилированных ферментов-маркеров применяли пероксидазу хрена, КАВ+-зависимые ферменты (например, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназу [6, 12]), АТР-зависимые ферменты (например, миокииазу, пируваткиназу), пенициллиназу и щелочную фосфатазу [13]. Рассмотрим некоторые результаты, полученные с помощью этих двух подходов.
 

1 ОСНОВНЫЕ ПРИНЦИПЫ
2 ПОЛУЧЕНИЕ МЕЧЕНЫХ БЕЛКОВ
3 МЕТОДЫ АНАЛИЗА
4 ОБСУЖДЕНИЕ
5 ЛИТЕРАТУРА

Методы иммуноанализа

Scroll To Top
[ Reset Settings ]
Rambler's Top100
Картаsns krf e0 nd5 ah81 rod solnce rod solnc cent1 cen40
rss
Карта