Сб, Май 14, 2011
Text Size

Иммунология - Иммунологические проблемы апоптоза - Барышников А.Ю.

§ 5.8. Моноклональные антитела против

цитоплазматического домена Fas-антигена

Цитоплазматический домен CD95(Fas/APO-l)-aHTHreHa является необходимым для передачи сигнала смерти, и за его роль в индукции клеточной смерти ему присвоили название домена смерти. МКА против этого домена получены в результате слияния спленоцитов мыши BALB/c, иммунизированной цитоплазматиче-ским доменом человеческого Fas-антигена, и клеток мышиной миеломы Sp2/0-Agl4. Гибридные клетки культивировали на селективной среде, содержащей гипоксантин, аминоптерин и тимидин. Скрининг гибридомных клонов проводили с помощью блоттинга, используя GST-Fas-CD (fusion-белок), иммобилизованный на по-ливинилидиновой мембране lmmobilon-P. Из 620 проверенных су-пернатантов были отобраны 15 позитивных клонов, которые были субклонированы дважды без фидерных клеток методом лимитирующих разведений. В процессе клонирования получен один клон (3D5), стабильно продуцирующий МКА IgGl к изотипа [Kami-tani Т., Nguyen Н. P. and Yeh E. Т. H., 1997]. МКА распознавали эпитоп домена смерти Fas-антигена и, более того, клон 3D5 не реагировал перекрестно с доменами смерти таких протеинов, как FADD/MORT1, CD40 и TNFR1. Количество Fas-антигена, определяемого в вестерн-блот-анализе с помощью МКА 3D5, очень сходно с количеством, определяемым МКА против внеклеточного домена методом проточной цитометрии. В дальнейшем полученные МКА использовались для исследования биохимических событий, происходящих после стимуляции Fas-антигена анти-Fas МКА. В исследование были включены 3 Fas-экспрессирующие клеточные линии BJAB, Raji и Jurkat. Все три линии показали сходные образцы изменений вслед за активацией. Перекрестное связывание Fas-антигена МКА СН-П приводило к образованию Fas-агрегатов с большей молекулярной массой, которые были стабильны в SDS и 5% b-меркаптоэтаноле. Их молекулярная масса была более 200 кДа, и они определялись через 10 мин. после инкубации с МКА СН-П с максимумом через 120 мин., в то время как Fas-мономеры исчезали во времени. В Jurkat-клетках

Методы иммуноанализа

Фильм "Земляне"

Документальный фильм, посвященный тематике жестокого обращения человека с животными. Фильм поделен на несколько частей, каждая из которых затрагивает проблемы в той или иной области, что в целом указывает на эгоизм и бессердечность человеческого рода, а также на пагубность животноводства и рыболовства в глобальных масштабах.
Scroll To Top
[ Reset Settings ]
Rambler's Top100
Картаsns krf e0 nd5 ah81 rod solnce rod solnc cent1 cen40
rss
Карта