Информационный сайт для врачей и студентов-медиков
 
Вс, Май 15, 2011
Text Size

Иммунология - Иммунологические проблемы апоптоза - Барышников А.Ю.

62

Глава 4. ICO-160 против CD95(Fas/AP0-1)-aHTnreHa

оценивались МКА ICO-160, полученные в лаборатории экспериментальной диагностики и биотерапии опухолей Российского онкологического научного центра им. Н. Н. Блохина РАМН.

§4.1. Получение моноклональных антител ICO-160

Гибридому ICO-160 получили при иммунизации мыши линии BALB/c мононуклеарами периферической крови донора, активированными фитогемагглютинином. С этой целью, у здорового донора взяли из локтевой вены 50,0 мл крови в пробирку с гепарином (50 ед/мл). Кровь развели средой RPMI-1640 без сыворотки и наслоили на градиент фиколл/верографин. Клетки центрифугировали 30 мин при 1600 об/мин. Затем собрали из интерфазы мононуклеары и 3 раза отмыли средой RPMI-1640. Мононуклеары поместили в пластиковый флакон в концентрации lx 106 клеток/мл и инкубировали 3 дня при 37°С в присугствии фитогемагглюти-нина (ФГА) в концентрации 1 мкг/мл. Клетки три раза отмыли раствором PBS и ввели в хвостовую вену мыши в концентрации 1 х 107 в объеме 1 мл. Мышь получила 3 инъекции с интервалом в 2 недели. Через 5 дней после последней иммунизации из селезенки выделили спленоциты гомогенизированием в гомогенизаторе Пот-тера. Спленоциты слили с клетками миеломной клеточной линии NS1 в соотношении 5:1; слияние проводили с помощью 50% полиэтиленгликоля с молекулярной массой 1500 Д. После этого клетки поместили в три 96-луночных плоскодонных плато в селективную среду HAT. Через 7 дней в лунках стали видны колонии. Продукцию антител определяли в непрямой реакции поверхностной иммунофлюоресценции (РИФ), которую учитывали на проточном цитофлюориметре FACScan (Becton Dickinson). Скрининг антител проводили на активированных фитогемагглютинином мо-нонуклеарах периферической крови. Гибридомные клетки одной из колоний, продуцирующие МКА и реагирующие с активированными мононуклеарами крови, дважды клонировали методом лимитирующих разведений. С этой целью делали серийные двукратные разведения и клетки помещали на фидер из спленоцитов

Методы иммуноанализа

Фильм "Земляне"

Документальный фильм, посвященный тематике жестокого обращения человека с животными. Фильм поделен на несколько частей, каждая из которых затрагивает проблемы в той или иной области, что в целом указывает на эгоизм и бессердечность человеческого рода, а также на пагубность животноводства и рыболовства в глобальных масштабах.
Scroll To Top
[ Reset Settings ]
Rambler's Top100
Картаsns krf e0 nd5 ah81 rod solnce rod solnc cent1 cen40
rss
Карта