Информационный сайт для врачей и студентов-медиков
 
Вс, Май 15, 2011
Text Size

Иммунология - Иммунологические проблемы апоптоза - Барышников А.Ю.

1992]. Отличительной чертой этих МКА против CD95(Fas/APO-l) антигена является то, что они не индуцируют апоптоз при взаимодействии с Fas-рецептором и не вызывают модуляцию этого антигена, а лишь определяют его наличие на поверхностной клеточной мембране. Подобными свойствами характеризуются МКА к эпитопу «С» молекулы CD95.

Четырехэтапная постановка реакции двойного окрашивания клеток создает массу трудностей. Во-первых, необходимо ставить множество контролей, во-вторых, требуются дефицитные хорошие изотип-специфические сыворотки, не дающие перекрестов с другими изотипами мышиных иммуноглобулинов. В связи с этим мы прямо конъюгировали МКА 1СО-160 с F1TC. Кроме того, использовали в своей работе коммерческие МКА UB2 против антигена CD95(Fas/APO-l), меченые фикоэритрином (РЕ).

Исследование проводили на клетках линий Jurkat, Molt-4, Raji, Daudi и HL-60. С этой целью 5 х 10э клеток инкубировали с 20 мкл МКА 1СО-160, окрашенных F1TC, при 4°С в течение 30 мин. После двукратного отмывания PBS к клеткам добавляли 20 мкл МКА UB2, меченых РЕ. Клетки снова инкубировали 30 мин в холодильнике и два раза отмывали PBS. Затем клетки ресуспендировали в 300 мкл PBS, содержащего 1 % формальдегид. Контролями служили неокрашенные клетки и клетки, окрашенные только одними из МКА.

Реакцию анализировали на проточном цитофлюориметре FACScalibur в программе DotPlot, где по оси абсцисс (FLI) располагались клетки, окрашенные F1TC, а по оси ординат (FL2) — клетки, окрашенные РЕ. Маркер устанавливали по интенсивности флюоресценции клеток, окрашенных только одними МКА. Подсчет проводили по системе квадрантной статистики для этих приборов. При этом в квадранте 1 располагались клетки, окрашенные только РЕ, в квадранте 2 — клетки, одновременно окрашенные F1TC и РЕ, в квадранте 3 — неокрашенные клетки, а в квадранте 4 — клетки, окрашенные F1TC. Клетки квадранта 2 указывали на реакцию двух МКА с одной и той же клеткой. Локализация клеток в квадрантах 1 и 4 указывала на то, что оба М КА реагируют с разными клетками.

Методы иммуноанализа

Фильм "Земляне"

Документальный фильм, посвященный тематике жестокого обращения человека с животными. Фильм поделен на несколько частей, каждая из которых затрагивает проблемы в той или иной области, что в целом указывает на эгоизм и бессердечность человеческого рода, а также на пагубность животноводства и рыболовства в глобальных масштабах.
Scroll To Top
[ Reset Settings ]
Rambler's Top100
Картаsns krf e0 nd5 ah81 rod solnce rod solnc cent1 cen40
rss
Карта