Информационный сайт для врачей и студентов-медиков
 
Вс, Май 15, 2011
Text Size

Иммунология - Иммунологические проблемы апоптоза - Барышников А.Ю.

При этом предотвращение формирования фрагментов по 50 кпо приводит к блокированию расщепления ДНК и апоптоза. j

Деградация ДНК до олигонуклеосомных фрагментов, связанная с активацией эндонуклеаз, используется в настоящее время как один из биологических маркеров апоптоза. Вместе с тем неизвестны цели и механизмы фрагментации ДНК при данном процессе.

Существует ряд прямых и косвенных методов оценки фрагментации ДНК и расщепления ядерного хроматина в процессе апоптоза.

1. Электрофорез ДНК. Метод позволяет определить расщепление ДНК на дискретные фрагменты — так называемая ДН К-овая лестница.

2. Метод TUNEL. Принцип его состоит в флуоресцентном энзиматическом мечении фрагментов ДНК в местах разрывов. Результаты оцениваются цитофлуориметрически.

3. Окраска клеток пропидиумом иодидом. Отражает потерю части хроматина при образовании апоптотических телец, что выявляется в виде появления фракции гиподиплоидных клеток при цитофлуориметрическом исследовании.

Метод TUNEL является современным методом, позволяющим наиболее точно оценить сам факт фрагментации ДНК, при этом появление характерных для апоптоза дискретных фрагментов находит отражение в виде пиков флуоресцентного сигнала. Интенсивность флуоресценции обратно пропорциональна величине фрагментов ДНК: при полном расщеплении на фрагменты по 180-200 по сигнал будет наиболее ярким, так как количество разрывов ДНК в этом случае максимальное.

Методом TUNEL оценка фрагментации ДНК в процессе апоптоза, индуцированного МКА против антигена CD95(Fas/APO-l), проведена на линии клеток Jurkat. Согласно данным VI Международного рабочего совещания по дифференцировочным антигенам лимфоцитов, линия Jurkat является оптимальной моделью для изучения С095-индуцированного апоптоза. Сравнили влияние связывания различных эпитопов CD95 на фрагментацию ДНК клеток. В качестве стандарта использовали МКА IPO-4 к эпитопу «А» молекулы CD95. Известно, что связывание эпитопов этой

Методы иммуноанализа

Фильм "Земляне"

Документальный фильм, посвященный тематике жестокого обращения человека с животными. Фильм поделен на несколько частей, каждая из которых затрагивает проблемы в той или иной области, что в целом указывает на эгоизм и бессердечность человеческого рода, а также на пагубность животноводства и рыболовства в глобальных масштабах.
Scroll To Top
[ Reset Settings ]
Rambler's Top100
Картаsns krf e0 nd5 ah81 rod solnce rod solnc cent1 cen40
rss
Карта